Prologen i Tour de France 2010 ble kjørt den 3. juli 2010 i Rotterdam. Prologen var den tredje lengste prologen i Tourens historie, og som vanlig var den regjerende verdens- og olympiske mester på tempo, Fabian Cancellara, storfavoritt før start. Tony Martin fra HTC-Columbia startet som nummer tretten og noterte seg for bestetid da han krysset mållinjen i Rotterdam, en ledelse han skulle holde det meste av dagen. Cancellara var så overlegen som spådd på forhånd og tråkket inn til seier, ti sekunder foran Martin.
Blant sammenlagtfavorittene var det Lance Armstrong som fikk den beste starten. Den sjudobbelte vinneren av Touren endte på fjerdeplass og tok fem sekunder på Alberto Contador, seksten sekunder på Aleksandr Vinokurov og sytten sekunder på Cadel Evans. Schleck-brødrene hadde en dårlig prolog og tapte mange sekunder til konkurrentene i sammendraget. Fränk tapte 35 sekunder til Armstrong, mens Andy endte 47 sekunder bak amerikaneren.
Edvald Boasson Hagen fikk en positiv debut i verdens hardeste sykkelritt med en flott niendeplass, drøye halvminuttet bak Cancellara, mens Thor Hushovd fikk en tung dag på sykkelen og endte på en 157.-plass, 1 minutt og 19 sekunder bak vinneren.[1]
092Xavier Florencio (CTT) hadde tidligere i sesongen brukt en salve som inneholder efedrin for å behandle et sittesår. Bruken av denne salven var ikke klarert med det medisinske støtteapparatet i Cervélo, og siden efedrin står på listen over ulovige middler hos anti-dopingbyråene, valgte Cervélo å suspendere Florencio inntil videre. Laget håpet å kunne kalle inn en erstatter, men tidsfristen for å gjøre forandringer på laget var på dette tidspunktet gått ut og Florencio ble regnet som en deltaker som ikke startet prologen.[2]